Fille d'Eric Lasserre, Florence Lasserre grandit dans la vallée de Chamonix au pied du Mont Blanc. Fervent écologiste, son père lui transmet très tôt son engagement pour la défense de l'environnement. En janvier 1996, elle rencontre Nicolas Hulot, venu en vacances dans la région. Le coup de foudre est immédiat et quelques mois plus tard, la jeune femme abandonne son travail d'hôtesse de l'air et sa région pour le rejoindre.
En 1997, le couple s'installe d'abord en Corse, puis dans le Luberon quelques années plus tard. En octobre 2002, Florence Lasserre et Nicolas Hulot se marient à Viens. En 2005, changement de décor, ils s'installent à Saint-Lunaire en Bretagne. C'est dans cette petite station balnéaire de la Côte d'Emeraude qu'elle va s'engager en politique pour la première fois.
En 2008, Florence Hulot devient adjointe chargée de l'environnement et du développement durable. Mais, après quelques mois, elle renonce à son mandat et redevient conseillère municipale. Elle poursuit son investissement en coulisses, et contribue à faire de Saint-Lunaire, l'une des communes les plus vertes de France. En 2013, elle quitte ses fonctions au Conseil municipal.
Le couple a deux fils, Titouan et Nelson.